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ELISA试剂盒分析蛋白质定量的新方法

发布时间:2017-03-14   点击次数:462次

ELISA试剂盒分析蛋白质定量的新方法
生物学研讨离不开定量。关于肯定定量,一般需要使用已知浓度的分子制作规范曲线。近来,研讨人员介绍了一种新办法,能使用串联质谱仪对多个蛋白质进行肯定定量。
在MARQUIS办法中,关于每个待定量的肽段,研讨人员建立重同位素符号的肽段。他们以不一样的量混合这些肽段,并在安排或细胞裂解后立即将一种混合物参加每个生物样品中。研讨小组的负责人以为:“这是关键的一步。你要尽早参加这些肽段,这么重同位素符号肽段和内源肽段的丢失可一起发生。
随后以同位素试剂符号样品,并参加质谱仪中。每个肽段发生两个峰:“重”峰代表组成的(加标)肽段,而“轻”峰代表内源性蛋白。经过定量前者碎片化所发生的符号离子,研讨人员能发生每个肽段的规范曲线。以后他们能测定对应内源性肽段的信号,断定样品中存在多少分子。
研讨小组使用MARQUIS定量了EGFR信号通路中的酪氨酸磷酸化。在几种配体影响以后,他们在多个时刻点定量了EGFR网络内的磷酸化动力学,完成了EGFR磷酸化位点的定量对比,并证明了关于每种配体,受体磷酸化在性质上类似,但数量上不一样。他们还培养了胶质母细胞瘤异种移植物,并使用这种办法定量了EGFR激酶按捺的效果。
据介绍,MARQUIS能一起定量10个样品中多达100种肽段。这只需要一台串联质谱仪(如三重四级杆)、市售的同位素符号试剂,以及重同位素符号的组成肽段。每个人都能完成。咱们期望创建出一种适当简略的办法,而不需要什么窍门。

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