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细胞培养前期准备

发布时间:2017-05-16   点击次数:617次

细胞培养前期准备
1、培养基、血清、胰酶、PBS、培养瓶、滴管、离心管 ; 
2、100ml玻璃瓶10个(用于分装血清,配成10%培养液);25-50ml玻璃瓶2个(装胰酶);500ml玻璃瓶2个(分装PBS); 
3、所有玻璃器皿洗净烘干泡酸再洗净烘干消毒;塑料或橡胶塞则洗净烘干蒸馏水煮30min 烘干消毒;
4、酒精灯、镊子、剪刀、广口玻璃瓶、消毒用酒精、棉球、吸耳球、酒精喷壶、橡胶手套
细胞培养基本技术
1、建立细胞冻存库,细胞冻存库应该分主细胞库和工作细胞库,当需要做实验时从主细胞库中复苏细胞建立工作细胞库。每一个冻存标本都应明确记录细胞的性质、代数及有无污染。
2、进行详细的实验记录,包括细胞系的种类及来源、有无污染、细胞代数和倍增时间、以及选择性突变。经过连续传代培养的细胞与它较早代数的冻存细胞相比,随着培养时间的延长,细胞在适应环境的过程中,其生物特性已发生了改变。培养的细胞由若干生长速度及活力各异的亚群组成。随着培养时间的延长生长速,度快及活力高的细胞亚群逐渐占优势这种选择性,趋势会影响整个细胞群的生物特性。应用不同代数的细胞连续进行实验则结果会发生偏差。建立细胞冻存库就能避免这种影响通过复苏相同代数的细胞,人们就能在较为均一的条件下重复实验。
3、为了避免细胞被外界污染物污染以及操作过程中产生的飞沫限制在超净工作台中。超净工作台需要合理的布置和维护,工作台内减少物品,使用时采用垂直气流比水平气流安全。
4、为了避免细胞发生污染,在同一个实验室内培养不同的细胞系所使用的培养基应分开使用。
细胞培养泛指所有体外培养,其含义是指从动物活体体内取出组织,于模拟体内生理环境等特定的体内条件下,进行孵育培养,使之生存并生长。细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域,成为zui重要的基础科学之一。
细胞培养常用培养基来维持细胞生长的所需营养,培养基一般分为固体培养基和液体培养基。液体培养基中加入一定的凝固剂(如琼脂)或固体培养物(如麸皮、大米等)便成为固体培养基。固体培养基在营养通风的表面可培养单个菌落,在细胞的分离鉴定、技术等方面起到相当重要的作用。
原代动物细胞培养需要注意:
1、实验材料要新鲜,从活体分离材料后要低温保存,并尽快进行细胞分离实验.
2、无菌操作.操作时用的培养液,可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素.
3、用酶法分离细胞时,注意酶液的浓度和控制消化时间.
贴块法分离细胞时,注意动作要轻柔,不要伤到细胞组织,组织块边缘尽量平整有利于细胞游离.
4、培养液的选择.不同的细胞有对培养液中营养的要求不同,根据所分离细胞的特性选择.
传代细胞培养需要注意:
1、无菌操作
2、控制消化时间
3、及时关注细胞生长状态
 

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