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ELISA试剂盒包被用抗体或抗原​

发布时间:2017-09-05   点击次数:705次

ELISA试剂盒包被用抗体或抗原​

(一)包被用抗原: 
ELISA试剂盒(酶联免疫剖析试剂盒)用于包被固相载体的抗原按其来历不一样可分为天然抗原、重组抗原和组成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物安排、微生物培育物等,须经获取纯化才干作包被用。如HBsAg能够从携带者的血清中获取,通常的细菌和病毒抗原能够从其培育物中获取,蛋白成份抗原可从富含此抗原的资料中获取等(例如AFP从脐带血或胎肝中获取)。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原,多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成份外,别的杂质少,并且无传染性,但纯化技能难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充沛除大肠杆菌成份,用于ELISA,在反响中可呈现假阳性,因不少受检者受大肠杆菌传染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然资料中别离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒(HCV)尚不能培育成功,并且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。现在检查抗HCV ELISA中所用包被抗原大多为依据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。在流行症诊断中,不少重组抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中获得使用。组成多肽抗原是依据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工组成的多肽片段。多肽抗原通常只富含一个抗原决定簇,纯度高,特异性也高,但由于分子量太小,通常难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被通常需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质(BSA)等偶联,借助于偶联物与固相载体的吸附,间接地结合到固相载体外表。使用多肽抗原的另一留意点为他仅能检查与其相应的抗体。一种蛋白质抗原通常富含多个不一样的能导致抗体发作的决定簇,因而在受
检血清中的别的抗体就不能与该多肽抗原发作反响。别的,某些微生物发作变异时通常发
生抗原构造改变,在这种情况下,用单个多肽抗原进行包被可导致别的抗体的漏检。
(二)包被用抗体:
ELISA试剂盒(酶联免疫剖析试剂盒)包被固相载体的抗体应具有高亲和力和高特异性,可取材于抗血清或含单克隆抗体的腹水或培育液。如免疫用抗原中富含杂质(即便是极微量的),在抗血清中将呈现杂抗体,有必要除掉(可用吸收法)后才干用于ELISA,以确保实验的特异性。抗血清不能直接用于包被,应先获取IgG,通常采用硫酸铵盐析和Sephadex凝胶过滤法。通常经硫酸铵盐析粗提的IgG已可用于包被,高度纯化的IgG性质不稳定。如需用高亲和力的抗体包被以进步实验的敏感性,则可采用亲和层析法以除掉抗血清中含量较多的非特异性IgG。腹水中单抗的浓度较高,特异性亦较强,因而不需要作吸收和亲和层析处理,通常可将腹水作恰当稀释后直接包被,必要时也可用纯化的IgG。使用单抗包被时应留意,一种单抗仅对于一种抗原决定簇,在某些情况下,用多种单抗混合包被,可获得非常好的作用。

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