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鱼磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶ELISA试剂盒

更新时间:2017-07-24

简要描述:

鱼磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶ELISA试剂盒
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鱼磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶ELISA试剂盒操作方法如图展示:

鱼磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶ELISA试剂盒双抗体夹心法

1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为110μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml4 过液。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。

2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml37 孵育0.51小时,洗涤。

4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml37 1030分钟。

5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

间接法

1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至110μg/ml,每孔加0.1ml4过液;

2.次日洗涤3次;

3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,37孵育1小时,洗涤;

4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml

5.37孵育35-60分钟,洗涤;

6.’zui后一遍用DDW洗涤。

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