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人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA试剂盒

更新时间:2017-07-26

简要描述:

人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA试剂盒
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ELISA试剂盒注意事项

 1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

 2. 在人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:

  (1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。

  (2人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA试剂盒包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH9.09.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4 1824小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.11.010μgml)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为110μgml

  (3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA试剂盒法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(OPD)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMBABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。

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